GB 5009.24-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M族的测定检测标准

　　1.范围
　　本标准规定了食品中黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2(以下简称AFTM1和AFTM2)的测定方法。
　　*法为同位素稀释液相色谱-串联质谱法,适用于乳、乳制品和含乳特殊膳食用食品中AFTM1和AFTM2的测定。
　　第二法为高效液相色谱法,适用范围同*法。
　　第三法为酶联免疫吸附筛查法,适用于乳、乳制品和含乳特殊膳食用食品中AFTM1的筛査测定。
　　*法 同位素稀释液相色谱-串联质谱法
　　2.原理
　　试样中的黄曲霉毒素M1和黄曲霉毒素M2用甲醇水溶液提取,上清液用水或磷酸盐缓冲液稀释后,经免疫亲和柱净化和富集,净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离,串联质谱检测,同位素内标法定量。
　　3.试剂和材料
　　除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
　　3.1 试剂
　　3.1.1 乙腈(CH3CN):色谱纯。
　　3.1.2 甲醇(CH3OH):色谱纯
　　3.1.3 乙酸铵(CH3 COONH4)。
　　3.1.4 氯化钠(NaCl)。
　　3.1.5 磷酸氢二钠(Na2HPO4)。
　　3.1.6 磷酸二氢钾(KH2PO4)。
　　3.1.7 氯化钾(KCl)。
　　3.1.8 盐酸(HCl)。
　　3.1.9 石油醚(CnH2n+2):沸程为30℃～60℃。
　　3.2 试剂配制
　　3.2.1 乙酸铵溶液(5mmol/L):称取0.39g乙酸铵,溶于1000mL水中,混匀。
　　3.2.2 乙腈-水溶液(25+75):量取250mL乙腈加入750mL水中,混匀。
　　3.2.3 乙腈-甲醇溶液(50+50):量取500mL乙腈加500mL甲醇中,混匀。
　　3.2.4 磷酸盐缓冲溶液(以下简称PBS):称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠(或2.92g十二水磷酸氢二钠)、0.20g磷酸二氢钾、0.20g氯化钾,用900mL水溶解后,用盐酸调节pH至7.4,再加水至1000mL。
　　3.3 标准品
　　3.3.1 AFTM1标准品(C17H12O7,CAS:6795-23-9):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
　　3.3.2 AFTM2标准品(C17H14O7,CAS:6885-57-0):纯度≥98%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
　　3.3.3 13C17-AFTM1同位素溶液(13C17H14O7):0.5μg/mL。
　　3.4 标准溶液配制
　　3.4.1 标准储备溶液(10μg/mL):分别称取AFTM1和AFTM2 1mg(*至0.01mg),分别用乙腈溶解并定容至100mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中,在-20℃下避光密封保存。临用前进行浓度校准(校准方法参见附录A)。
　　3.4.2 混合标准储备溶液(1.0μg/mL):分别准确吸取10μg/ ML AFT M和AFTM标准储备液1.00mL于同一10mL容量瓶中,加乙腈稀释至刻度,得到1.0μg/mL的混合标准液。此溶液密封后避光4℃保存,有效期3个月。
　　3.4.3 混合标准工作液(100ng/mL):准确吸取混合标准储备溶液(1.0μg/mL)1.00mL至10mL容量瓶中,乙腈定容。此溶液密封后避光4℃下保存,有效期3个月。
　　3.4.4 50ng/mL同位素内标工作液1(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)1mL,用乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定液体样品时使用。有效期3个月。
　　3.4.5 5ng/mL同位素内标工作液2(13C17-AFTM1):取AFTM1同位素内标(0.5μg/mL)100μL,用乙腈稀释至10mL。在-20℃下保存,供测定固体样品时使用。有效期3个月。
　　3.4.6 标准系列工作溶液:分别准确吸取标准工作液5μL、10μL、50μL、100μL、200μL、500μL至10mL容量瓶中,加入100μL50ng/mL的同位素内标工作液,用初始流动相定容至刻度,配制AFTM1和AFTM2的浓度均为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL的系列标准溶液。
　　4.仪器和设备
　　4.1 天平:感量0.01g、0.001g和0.00001g。
　　4.2 水浴锅:温控50℃±2℃。
　　4.3 涡旋混合器。
　　4.4 超声波清洗器。
　　4.5 离心机:≥6000r/min。
　　4.6 旋转蒸发仪。
　　4.7 固相萃取装置(带真空泵)。
　　4.8 氮吹仪。
　　4.9 液相色谱-串联质谱仪:带电喷雾离子源。
　　4.10 圆孔筛:1mm～2mm孔径。
　　4.11 玻璃纤维滤纸:快速,高载量,液体中颗粒保留1.6μm。
　　4.12 一次性微孔滤头:带0.22μm微孔滤膜(所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象,方可使用）。