GB 5413.10-2010 婴幼儿食品和乳品中维生素K1检测标准

　　1.范围
　　本标准规定了婴幼儿食品和乳品中维生素K1的测定方法。
　　本标准适用于婴幼儿食品和乳品中维生素K1的测定。
　　2.规范性引用文件
　　本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件,其*新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。
　　3.原理
　　用脂肪酶降解试样中的脂肪和不饱和脂肪酸,对于含淀粉试样需先用淀粉酶降解试样中的淀粉,经碱皂化后,用正己烷提取维生素K1。通过液相色谱法分离,柱后还原维生素K1,荧光检测器检测,外标法定量。
　　4.试剂和材料
　　除非另有规定,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
　　4.1 氢氧化钠溶液(10mol/L):临用前配制。
　　4.2 95%乙醇。
　　4.3 饱和氯化钠溶液。
　　4.4 正己烷:色谱纯。
　　4.5 无水硫酸钠。
　　4.6 甲醇:色谱纯。
　　4.7 二氯甲烷:色谱纯。
　　4.8 冰醋酸。
　　4.9 氯化锌。
　　4.10 无水乙酸钠。
　　4.11 流动相:甲醇(4.6)900mL,二氯甲烷(4.7)100mL,冰醋酸(4.8)0.3mL,氯化锌(4.9)1.5g,无水乙酸钠(4.10)0.5g,溶解后用0.45μm滤膜过滤。
　　4.12 淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg。
　　4.13 脂肪酶:酶活力≥700U/mg。
　　4.14 锌粉:粒度50μm～70μm。
　　4.15 维生素K1标准溶液:标准溶液浓度校正方法参见附录A。
　　4.15.1 维生素K1标准贮备液(2mg/mL):称取0.05g维生素K1标准品(*到0.1mg),于25mL容量瓶中,用正己烷溶解定容。
　　4.15.2 维生素K1标准中间液(20μg/mL):取标准贮备液(4.15.1)1mL加正己烷定容至100mL。
　　5.仪器和设备
　　5.1 高效液相色谱仪,带有荧光检测器。
　　5.2 天平:感量为0.1mg。
　　5.3 分液漏斗:250mL。
　　5.4 旋转蒸发器。
　　5.5 恒温空气浴振荡器。
　　5.6 离心机:转速≥3000转/分钟。
　　5.7 氮吹仪。
　　6.分析步骤
　　6.1 试样处理
　　6.1.1 含淀粉的试样
　　称取混合均匀的固体试样约2.5g或液体试样约10g(*到0.1mg)于三角瓶中,加入0.5g淀粉酶(4.12),用30mL温水溶解。
　　6.1.2 不含淀粉的试样
　　称取混合均匀的固体试样约2.5g或液体试样约10g(*到0.1mg)于三角瓶中,用30mL温水溶解。
　　6.2 测定液的制备
　　向上述处理过的试样溶液中加入1g脂肪酶(4.13),于37℃±5℃恒温空气浴振荡器中振荡过夜使其充分酶解。取岀酶解好的试样,加入2nL氢氧化钠溶液(4.1),用50nL乙醇(4.2)将溶液转入250mL的分液漏斗中,充分混匀(必要时加少量饱和氯化钠溶液(4.3))。加入50mL正己烷(4.4)。充分振摇2min,静置分层。放出下层水相于另一个250mL分液漏斗中,留下有机相。向水相中再次加入50mL正己烷再次萃取。合并有机相。用适量蒸馏水洗有杋相两次。将有机相通过无水硫酸钠(4.5)脱水过滤到一个500mL的烧瓶中,在旋转蒸发器上于40℃±2℃下蒸发至近干。用正己烷(4.4)转移残留物到一个10mL试管中,置氮吹仪上于40℃±2℃下吹干,准确加入1mL正己烷(4.4),充分振荡溶解残留物。将试管放入冰箱中在0℃以下冷冻h备用。
　　6.3 测定
　　6.3.1 色谱参考条件