DB21/T 1545-2007 大米中苄嘧磺隆残留量的测定 高效液相色谱法检测标准

　　1 范围
　　本标准规定了大米中苄嘧磺隆残留量的高效液相色谱测定方法。
　　本标准适用于大米中苄嘧磺隆残留量的测定。
　　本标准的方法检出限为0.01mg/kg。
　　2 规范性引用文件
　　下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件，其*新版本适用于本标准。
　　GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法
　　NY/T 788 农药残留试验准则
　　3 原理
　　试样经二氯甲烷提取后，经液一液萃取，Cl8固相萃取柱净化，用髙效液相色谱反相分离，紫外检测器检测，外标法定量。
　　4 试剂和材料
　　所有的试剂如未注明规格，均为分析纯；实验用水，如未注明，均应符合GB/T 6682 中一级用水的要求。
　　4.1 正己烷
　　4.2 乙腈。
　　4.3 乙腈：色谱纯。
　　4.4 乙酸
　　4.5 二氯甲烷。
　　4.6 氨水溶液：0.15mol/L。
　　4.7 苄嘧磺隆标准物质：纯度≥99%。
　　4.8 标准溶液
　　4.8.1 苄嘧磺隆标准贮备液，浓度为100μg/mL。准确称取苄嘧磺隆0.0100g，置于100.0mL容量瓶中，加乙腈(4.3)溶解并定容至刻度。贮存于0~5℃的冰箱中。
　　4.8.2 苄嘧磺隆标准中间溶液：浓度为10μg/mL。准确移取1.0mL苄嘧磺隆标准贮备溶液(4.8.1)于10.0mL容量瓶中，用乙腈(4.3)定容。贮存于0~5℃的冰箱中。
　　4.8.3 苄嘧磺隆标准曲线工作液：分别准确移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL苄嘧磺隆标准中间溶液(4.8.2)于5个10.0mL容量瓶中，用乙腈(4.3)定容，混和均匀。临用前配制。此标准系列的苄嘧磺隆浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL。
　　4.9 C18固相萃取柱(M型，250MG)：使用前依次用25mL乙腈(4.2)，25mL氨水(4.6)淋洗，备用。
　　4.10 滤膜：0.45μm。
　　5 仪器设备
　　5.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。
　　5.2 固相萃取装置。
　　5.3 旋转蒸发仪。
　　5.4 真空泵。
　　5.5 超声波振荡器。
　　6 分析步骤
　　6.1 样品的采集、贮存及制备方法
　　样品采集、贮存、及制备按照NY/T 788 标准执行。粉碎后的大米样品过20目筛。
　　6.2 样品处理
　　6.2.1 提取
　　准确称取25g(±0.1g)制备好的试样于锥形瓶中。向锥形瓶中加入100mL二氯甲烷(4.5)，超声提取10min，过滤。再重复超声提取两次，合并三次滤液。滤液用旋转蒸发仪于35℃水浴下浓缩至近干。
　　6.2.2 净化
　　用50mL乙腈(4.2)溶解残渣，超声2min，移入125mL分液漏斗中，用正已烷萃取3次，每次50mL，振摇2min，弃去正己烷相，乙腈相用旋转蒸发仪于35℃水浴下浓缩至近干。残渣用10m氨水溶液(4.6)超声溶解，过预处理好的C18固相萃取柱(4.9)，控制流速小于1.0mL/min。再用10mL氨水溶液(4.6)清洗所用浓缩瓶，同样过C18固相萃取柱。然后用约10mL乙腈(4.2)洗脱，收集洗脱液，用旋转蒸发仪于35℃水浴下浓缩至近干。*后用乙腈(4.2)定容至2.0mL，过0.45μm滤膜，供液相色谱测定。
　　6.3 测定
　　6.3.1 液相色谱参考条件
　　色谱柱：C18，5μm，3.9×150mm或相当者。
　　流动相：乙腈+0.5%的醋酸水溶液(v+v，50+50)。
　　流速：0.9mL/min。
　　柱温：30℃。
　　检测波长：234nm。
　　进样量：10uL。
　　6.3.2 液相色谱测定
　　取苄嘧磺隆标准工作溶液系列(4.8.3)及样品溶液各10μL，注入髙效液相色谱仪进行分析，用外标法定量。
　　7 结果计算
　　试样中的苄嘧磺隆含量按下式计算：
　　δ=c·v/m
　　式中：
　　δ——样品中苄嘧磺隆残留量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
　　C——从标准曲线上得到的待测样液中苄嘧磺隆的浓度，单位为微克每毫升(μg/m)；
　　V——样液*终定容体积，单位为毫升(mL)；
　　m——称取的试样量，单位为克(g)。